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Características cinéticas das colinesterases de Rã touro (Rana catesbeiana) e Sapo cururu (Rhinella ictérica)



Author(s): Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC); Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC); Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC); Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC);
Presenter: Lígia Sampaio Lanzarin

O uso de biomarcadores é vital na área de ecotoxicologia pois é uma ferramenta eficiente de análise dos efeitos em estágios iniciais da contaminação em organismos Uma vez que diferentes espécies apresentam sistemas fisiológicos distintos, é essencial a padronização dos ensaios escolhidos, para que se obtenham as condições ótimas para a espécie alvo do estudo. No caso de ensaios enzimáticos, fatores como pH, temperatura e concentração de substrato influenciam nos resultados. As colinesterases são enzimas que catalisam a hidrólise de ésteres de colina atuando como moduladores do sistema nervoso colinérgico. Sua atividade é inibida por agrotóxicos organofosforados e carbamatos, tornando essa classe de enzimas importantes biomarcadores dos efeitos causados por estes compostos. O sapo cururu (Rhinella icterica) é um anuro nativo da região da Mata Atlântica e a Rã touro (Rana catesbeiana) é uma espécie invasora, originária da América do Norte. A ampla distribuição e abundância de indivíduos faz dessas espécies bons modelos para estudos de avaliação de contaminação ambiental. Este estudo foi realizado para se obter o perfil cinético das colinesterases de R. ictérica e R. catesbeiana, visando a padronização desse ensaio para seu uso em estudos ecotoxicológicos. Foram coletadas amostras de cérebro, fígado, músculo e pele ambas as espécies (n =12). Para os ensaios de atividade enzimática foi utilizado um pool de cada um dos tecidos coletados. A atividade catalítica das colinesterases foi determinada pelo método colorimétrico de Ellman com 10 diferentes concentrações de iodeto de acetiltiocolina, variando de 0,0156 mM a 8 mM. A partir dos resultados das curvas cinéticas foi calculado o Km aparente (Kmapp) e a velocidade máxima (Vmax) da reação através de regressão não-linear ajustado ao modelo de Michaelis-Menten. Em R. ictérica, o tecido que apresentou maior atividade foi o cérebro, com valor de Vmax = 93,81 ± 2,38 mU/mg de proteína e Kmapp = 0,286 ± 0,029 mM, seguido pela pele que apresentou um Vmax = 38,13 ± 1,45mU/mg de proteína e Km app = 0,984 ± 0,117 mM. O fígado apresentou Vmax = 31,35 ± 0,82 mU/mg e Kmapp = 0,474 ± 0,046 mM e o músculo apresentou Vmáx = 25,24 ± 3,77 mU/mg e Kmapp =1,740 ± 0,697 mM, sendo então o tecido com menor atividade nesse estudo. Em R. catesbeiana o cérebro também apresentou a maior atividade, com Vmax = 108,7 ± 2,87 mU/mg e Kmapp = 0,2789 ± 0,030 mM, seguido pelo fígado, com Vmax = 44,16 ± 2,88 mU/mg e Kmapp = 0,1487 ± 0,044 mM. Estudos avaliando a cinética de colinesterases em peixes já demonstraram sua alta atividade em músculos e cérebro, devido principalmente ao seu papel como reguladora de comunicação neuronal. Portanto, a atividade elevada obtida no ensaio com cérebro está em concordância com trabalhos utilizando outros modelos animais. Podemos concluir que o cérebro é o tecido mais indicado para ensaios que busquem avaliar o efeito inibitório de contaminantes nas colinesterases. Considerando o modelo utilizado para a obtenção dos parâmetros cinéticos, sugere-se que a concentração ideal de substrato para o ensaio de atividade de colinesterases no cérebro é de 2,8 mM tanto para R. icterica quanto para R. catesbeiana, ou seja, aproximadamente 10 vezes o Kmapp obtido nas análise

Keywords: Acetilcolinesterase; butirilcolinesterase; Rhinella icterica

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